亚洲AV永久无码精品古装片,欧美性生交XXXXX无码小说

技術(shù)文章ARTICLE

您當(dāng)前的位置：首頁 > 技術(shù)文章 > 制備YAC DNA進行Southern印跡分析

制備YAC DNA進行Southern印跡分析

發(fā)布時間： 2021-12-24　　點擊次數(shù)： 928次

材料與儀器
酵母菌
AHC SCE SCEM Tris·Cl EDTA TE 乙酸甲 RNase A 異丙醇 NaCl
培養(yǎng)箱離心管轉(zhuǎn)子
步驟

1. 接種一個紅色的含YAC克隆的酵母菌落于盛有20 ml AHC培養(yǎng)基的250 ml 三角燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)搖床上30℃ 250 r/min 振蕩培養(yǎng)24 h。

2. 擴大培養(yǎng)：取1ml 由步驟1獲得的粉紅色菌懸液接種于盛有100 ml AHC培養(yǎng)基的 1 000 ml三角燒瓶中，于30℃ 250 r/min搖床培養(yǎng)24 h。

3. 將菌懸液移入2個50 ml 的錐形離心管中，于2 000 g 離心5 min，棄上清，共用5 ml SCE緩沖液重懸菌體，并合并到一個試管中。

4. 加1 ml SCEM緩沖液，在旋轉(zhuǎn)搖床中37℃ 100 r/min 輕搖晃混勻。

5. 于4℃ 2 000 g 離心棄上清，菌體用5 ml Tris/EDTA裂解液重懸。

6. 加0.5 ml 10%SDS顛倒混合數(shù)次，于65℃溫育20 min。

7. 加2 ml 冰浴的5 mol/l pH4.8的乙酸甲緩沖液，顛倒混合數(shù)次后置于冰浴60 min。

8. 于室溫2 000 g 離心10 min，小心將含核酸的上清轉(zhuǎn)移到一個新管中。加室溫2倍體積的95%乙醇，顛倒混勻。

9. 于室溫2 000 g 離心5 min，棄上清，在室溫晾干10~15 min，分別加入3 ml TE緩沖液，pH8.0于37℃過夜溶解核酸。

10. 加入0.1 ml 的1 mg/ml 無DNA酶活性的RNase A，于37℃溫育1 h。

11. 加入6 ml 室溫的異丙醇，振蕩并顛倒混勻后用一支毛細(xì)管纏繞起染色體，然后溶于0.5 ml TE緩沖液中。

12. 加入50 μl 5 mol/l NaCl和2 ml 95%乙醇，顛倒混勻。

13. 再一次纏繞起染色體DNA，并溶于0.5 ml TE緩沖液中，于4℃保存?zhèn)溆谩?/div>
14. 取毎小份2 μg 的YAC DNA和15 μg 用以構(gòu)建YAC文庫的某物種或個體的基因組DNA。

15. 采用幾種高頻切割的限制性內(nèi)切酶進行酶切，接著用單拷貝探針進行雜交和核酸印跡分析。

16. 一旦通過核酸印跡實驗確證YAC克隆，那么可通過制備染色體凝膠校塊塞和進行脈沖電場凝膠電泳，來明確重組YAC的大小并對其穩(wěn)定性進行初步評價。

同實驗其他方法
YAC 克隆的分析實驗
1. 用接種棒將含重組載體pYAC的AB1380菌株劃線接種在AHC平板上，倒扣平板于30℃培養(yǎng)，直至長出1~3 mm 大小的紅色菌落為止。 2. 短期保存：用Parafilm膜將平
以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。

下一篇：牙簽法小量制備質(zhì)粒DNA實驗

上一篇：YAC 克隆的分析實驗實驗庫參考來源：

產(chǎn)品中心 Products

午夜少妇在线观看视频,国产97色在线 | 日韩,国产欧美日韩一区二区三区,欧美成人电影

制備YAC DNA進行Southern印跡分析

材料與儀器

步驟

同實驗其他方法